熒光激活細胞分選術FACS在抗體表達檢測中的應用原理和優勢是什么?
日期:2025-04-23 13:15:01
熒光激活細胞分選術(FACS)在抗體表達檢測中具有重要作用,以下是其應用原理和優勢:
1.應用原理
細胞標記:利用熒光標記的抗體與細胞表面或細胞內的目標抗原進行特異性結合。這些熒光標記的抗體能夠識別并結合到表達相應抗原的細胞上,使細胞帶上熒光信號。
細胞分選:將標記好的細胞懸液通過一個流動室,使細胞排成單行逐個通過激光束照射區域。當細胞被激光照射時,會激發熒光標記發出特定波長的熒光信號,同時還會產生散射光信號。儀器通過檢測這些信號來識別細胞的特征,如細胞大小、內部結構以及是否表達目標抗原等。根據預先設定的參數,儀器會對帶有特定熒光信號的細胞進行分選,將其收集到不同的收集管中,從而實現對表達特定抗體的細胞進行分離和檢測。
2.優勢
高特異性:使用特異性的熒光標記抗體,能夠準確地識別和結合目標抗原,減少非特異性結合,從而提高檢測的特異性,確保檢測到的是真正表達目標抗體的細胞。
多參數分析:可以同時檢測多個參數,如細胞的大小、粒度、熒光強度等。不僅能夠確定細胞是否表達目標抗體,還能了解細胞的其他特征,如細胞的活化狀態、細胞周期等,為深入研究細胞的生物學特性提供更全面的信息。
高靈敏度:能夠檢測到細胞表面或細胞內低水平表達的抗體。儀器對熒光信號的檢測非常靈敏,可以區分出表達量有細微差異的細胞群體,有助于發現那些表達量較低但具有重要生物學意義的細胞。
活細胞分析與分選:可以在保持細胞活性的狀態下進行檢測和分選,使得后續能夠對分選得到的細胞進行進一步的培養、功能研究等,這對于研究細胞的生理功能和細胞間相互作用至關重要。
快速高效:能夠在短時間內對大量細胞進行分析和分選,大大提高了實驗效率。例如,每秒可以分析數千個細胞,能夠快速獲得大量的數據,適用于各種規模的實驗研究。