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重組抗體片段的表達和純化

日期:2023-12-05 15:34:25


    重組抗體片段的表達和純化是生物技術(shù)領(lǐng)域的一個重要方面,尤其在藥物開發(fā)和研究中有著廣泛應用。重組抗體片段包括單鏈變異片段(scFv)、單域抗體(sdAb)、Fab片段等。這些片段通常通過基因工程方法在宿主細胞中表達,然后通過一系列步驟進行純化。以下是重組抗體片段表達和純化的一般過程:

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一、表達
?    基因克隆:首先設(shè)計并合成包含抗體片段編碼序列的基因構(gòu)建,將其克隆到適當?shù)谋磉_載體中。
 
?    宿主選擇:選擇合適的宿主細胞進行表達。常見的宿主細胞包括大腸桿菌(E. coli)、酵母、昆蟲細胞和哺乳動物細胞等。每種宿主系統(tǒng)都有其優(yōu)勢和局限性,例如,E. coli表達系統(tǒng)操作簡單、成本低,但可能不適合復雜的糖基化修飾;而哺乳動物細胞則能進行較為復雜的后翻譯修飾。
 
?    轉(zhuǎn)染和表達:將表達載體轉(zhuǎn)染到宿主細胞中,并在適宜的條件下誘導抗體片段的表達。
 
?    培養(yǎng)和收獲:在適當?shù)呐囵B(yǎng)條件下擴增宿主細胞,并在表達達到峰值時收獲細胞或細胞上清,以獲取含有重組抗體片段的樣品。
 
二、純化
?    裂解(如果需要):如果抗體片段在宿主細胞內(nèi)部表達,需要對細胞進行裂解以釋放抗體片段。
 
?    初步純化:通常使用親和層析作為第一步純化手段,利用抗體片段Fc部分與蛋白A或蛋白G的高親和力進行特異性結(jié)合。如果抗體片段沒有Fc區(qū)域,可以設(shè)計一個帶有標簽(如His標簽)的表達載體,利用金屬親和層析進行純化。
 
?    洗脫:通過改變緩沖液的pH或離子強度,將抗體片段從親和層析介質(zhì)上洗脫下來。
 
?    進一步純化:為了提高純度,可能還需要進行離子交換層析、凝膠過濾層析、親水相互作用層析等其他層析步驟。
 
?    緩沖液交換和濃縮:通過透析或超濾技術(shù)將抗體片段轉(zhuǎn)移到適當?shù)木彌_液中,并濃縮至所需的濃度。
 
?    質(zhì)量控制:通過SDS-PAGE、西方印跡、ELISA等方法對純化的抗體片段進行質(zhì)量控制,確保其純度和活性。
 
?    保存:將純化的抗體片段在適當條件下保存,如-80°C冷凍保存或添加穩(wěn)定劑并在4°C下保存。
 
?    整個過程需要根據(jù)具體的抗體片段和應用目的進行優(yōu)化,以確保最終產(chǎn)品的純度、產(chǎn)量和生物活性滿足要求。

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