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elisa抗體阻斷實驗原理

日期:2023-09-08 15:51:00


    ELISA酶聯(lián)免疫吸附試驗抗體阻斷實驗是一種常用的方法,用于檢測和驗證抗體對特定抗原的特異性結(jié)合能力。其原理如下:
 
    實驗準(zhǔn)備:將目標(biāo)抗原固定在固相(如微孔板)上,并進行非特異性結(jié)合位點的封閉,以避免后續(xù)步驟中非特異性背景信號的干擾。
 
    樣品處理:將待測抗體與目標(biāo)抗原預(yù)先混合,并孵育一段時間,使其形成抗原-抗體復(fù)合物。
 
    反應(yīng)與洗滌:將混合物加入已經(jīng)固定了目標(biāo)抗原的微孔板中,使復(fù)合物與固相上的抗原結(jié)合。然后進行多次洗滌,去除非特異性的未結(jié)合物質(zhì)。
 
    抗體標(biāo)記物添加:加入與待測抗體不競爭的標(biāo)記物標(biāo)記的第二抗體或探針抗體。該抗體會結(jié)合到待測抗體的Fc區(qū)域。
 
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    酶標(biāo)記物的反應(yīng)與洗滌:加入酶標(biāo)記物底物,使酶產(chǎn)生染色反應(yīng)。此時,標(biāo)記物所在的位置與酶活性成正比。
 
    反應(yīng)停止與測量:通過加入染色反應(yīng)停止劑,停止酶反應(yīng),并阻斷染色產(chǎn)物生成。利用光譜法或比色法測量吸光度,即可定量分析待測抗體的阻斷效果。
 
    根據(jù)實驗設(shè)計和需要,可以將該方法用于血清、細(xì)胞上清液、組織勻漿等樣品中的待測抗體的特異性結(jié)合能力檢測與驗證。實驗結(jié)果可用于評估抗體的親和力、特異性以及其對其他類似抗原的交叉反應(yīng)性。

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