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小鼠抗體效價(jià)測(cè)定實(shí)驗(yàn)方法

日期:2023-07-17 16:41:49

    小鼠抗體效價(jià)測(cè)定是一種常用的實(shí)驗(yàn)方法,用于評(píng)估小鼠血清中特定抗體的活性和濃度。下面是一種常見(jiàn)的小鼠抗體效價(jià)測(cè)定方法——間接酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)的步驟:
 
準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)材料
 
目標(biāo)抗原:準(zhǔn)備待測(cè)抗原(如蛋白質(zhì)、多肽或病原體)。
小鼠血清:獲得小鼠免疫后的血清樣品。
 
固定抗原:
 
將待測(cè)抗原溶液加入微孔板孔中,使其吸附在孔底表面。
孔底表面可能需要預(yù)先涂覆一個(gè)適當(dāng)?shù)墓滔嗖牧希ㄈ缗Q灏椎鞍祝┮栽鰪?qiáng)抗原與孔底的結(jié)合。
 
孔洗滌:
 
加入洗滌緩沖液,用于清洗未結(jié)合的抗原并減少非特異性結(jié)合。
 
樣品處理:
 
將小鼠血清樣品按一定倍數(shù)稀釋,以獲得一系列不同濃度的血清。
加入稀釋后的小鼠血清樣品到固定的抗原孔中。
 
抗原結(jié)合:
 
孔板孔中的抗原與小鼠血清中的特定抗體結(jié)合。
抗原孔中未結(jié)合的小鼠抗體會(huì)被洗滌緩沖液清洗掉。
 
檢測(cè)抗體:
 
加入檢測(cè)用的二抗(如抗小鼠IgG的辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記二抗)到各孔中。
洗滌孔以去除未結(jié)合的二抗。
 
底物反應(yīng):
 
加入底物溶液,使酶標(biāo)記的二抗催化產(chǎn)生可測(cè)量的信號(hào)。
反應(yīng)時(shí)間按實(shí)驗(yàn)要求進(jìn)行。
 
反應(yīng)終止:
 
加入停止溶液,終止底物反應(yīng)。
 
讀取吸光度:
 
使用酶標(biāo)儀讀取各孔的吸光度。
吸光度值與抗體在血清中的濃度成正比關(guān)系。
 
數(shù)據(jù)分析:
 
根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線或者計(jì)算方法,計(jì)算出抗體的效價(jià)(如半最大效價(jià))。
以上是一種常見(jiàn)的小鼠抗體效價(jià)測(cè)定方法,具體步驟可能因?qū)嶒?yàn)?zāi)康暮头椒ㄗ兎N而有所差異。在實(shí)施實(shí)驗(yàn)前,建議參考相關(guān)文獻(xiàn)、操作手冊(cè)或咨詢專業(yè)人士以獲得更具體和準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)方案。

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