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單克隆抗體的純化工藝流程步驟

日期:2023-06-27 15:36:33

    單克隆抗體的純化工藝流程通常包括以下步驟:
 
一、細(xì)胞培養(yǎng)和收獲:
    1. 將表達(dá)單克隆抗體的細(xì)胞(通常是哺乳動(dòng)物細(xì)胞株)培養(yǎng)在適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基中。
    2. 監(jiān)測(cè)細(xì)胞密度和生長(zhǎng)情況,確保達(dá)到最佳表達(dá)水平。
    3. 當(dāng)細(xì)胞達(dá)到一定密度時(shí),收獲細(xì)胞,通常通過(guò)離心將細(xì)胞分離出來(lái)。
 
二、細(xì)胞破碎和固態(tài)物去除:
    1. 使用適當(dāng)?shù)钠扑榉椒ǎㄈ绯暡?、高壓等)破碎收獲的細(xì)胞,釋放細(xì)胞內(nèi)的單克隆抗體。
    2. 除去細(xì)胞碎片和固態(tài)物質(zhì),如細(xì)胞壁殘留、脂質(zhì)、核酸等,可通過(guò)離心和過(guò)濾等步驟實(shí)現(xiàn)。
 
三、親和層析:
    1. 準(zhǔn)備含特異性配體的親和層析柱,配體可以是與單克隆抗體特異結(jié)合的蛋白、蛋白G/A等。
    2. 將破碎后的細(xì)胞上清液通過(guò)親和柱,使單克隆抗體與配體結(jié)合。
    3. 通過(guò)洗脫步驟,使用適當(dāng)?shù)南疵搫ㄈ绲蚿H、高鹽、可競(jìng)爭(zhēng)性配體等)將單克隆抗體從柱上洗脫。
 
四、離子交換層析:
    1. 將洗脫的樣品加載到離子交換層析柱上,根據(jù)單克隆抗體的等電點(diǎn)和親和性進(jìn)行分離。
    2. 使用不同梯度的鹽濃度或pH值,逐漸洗脫不同的蛋白質(zhì)成分,將單克隆抗體分離純化。
 
五、尺寸排阻層析:
    1. 將經(jīng)過(guò)離子交換層析的樣品加載到尺寸排阻層析柱上。
    2. 根據(jù)分子大小,通過(guò)柱上的多孔素材選擇性地分離和洗脫目標(biāo)單克隆抗體。
 
六、濃縮和 Buffer 調(diào)整:
    1. 使用適當(dāng)?shù)臐饪s方法(如超濾、沉淀等)濃縮純化后的單克隆抗體樣品。
    2. 調(diào)整樣品的緩沖液,以適應(yīng)后續(xù)的儲(chǔ)存、分析或制劑的要求。
 
七、純化檢測(cè)和分析:
    1. 對(duì)純化后的單克隆抗體樣品進(jìn)行質(zhì)量分析,如SDS-PAGE凝膠電泳、Western blot等。
    2. 測(cè)定單克隆抗體的濃度和純度,可以使用光譜法(如280 nm吸光度法)和蛋白質(zhì)定量方法(如Bradford法)進(jìn)行。
 
    這些步驟可以根據(jù)需要進(jìn)行優(yōu)化和調(diào)整,具體的純化工藝流程可能會(huì)因目標(biāo)單克隆抗體的特性和實(shí)驗(yàn)室的實(shí)際情況而有所不同。

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