標(biāo)簽抗體與內(nèi)參抗體的區(qū)別是什么?
日期:2023-06-01 15:08:36
標(biāo)簽抗體和內(nèi)參抗體都是用于免疫印跡(Western blotting)等蛋白質(zhì)檢測技術(shù)中的關(guān)鍵元素。
首先,我們需要了解一下 Western blotting 技術(shù)的基本原理。Western blotting 技術(shù)是利用特異性抗體結(jié)合目標(biāo)蛋白質(zhì),并將其從復(fù)雜的混合蛋白質(zhì)體系中分離出來,然后通過抗體與蛋白質(zhì)結(jié)合反應(yīng)產(chǎn)生信號,再利用檢測系統(tǒng)檢測、定量這些信號,來判斷待測樣品中目標(biāo)蛋白質(zhì)的存在和表達(dá)水平。
現(xiàn)在來說說標(biāo)簽抗體和內(nèi)參抗體的區(qū)別:
1、標(biāo)簽抗體
標(biāo)簽抗體通常是特異性識別某種特殊標(biāo)記的抗體,例如 FLAG 標(biāo)簽、HA 標(biāo)簽、Myc 標(biāo)簽等常見的標(biāo)簽。在 Western blotting 實(shí)驗中,通常會利用這些標(biāo)簽進(jìn)行蛋白質(zhì)的表達(dá)和檢測。例如,當(dāng)我們在表達(dá)待檢測蛋白質(zhì)時,同時將其與 FLAG 標(biāo)簽融合,那么在 Western blotting 實(shí)驗中,我們就可以用相應(yīng)的抗 FLAG 標(biāo)簽的抗體進(jìn)行檢測。
標(biāo)簽抗體在 Western blotting 實(shí)驗中通常作為檢測實(shí)驗的主要抗體,用于檢測目標(biāo)蛋白質(zhì)的存在與否。由于標(biāo)簽抗體可以專門識別標(biāo)記,具有極高的特異性和靈敏度,因此在實(shí)驗中被廣泛使用。
2、內(nèi)參抗體
內(nèi)參抗體是用于標(biāo)準(zhǔn)化 Western blotting 實(shí)驗中某些步驟的抗體。Western blotting 實(shí)驗中,我們往往需要使用內(nèi)參蛋白來作為比較基準(zhǔn)。內(nèi)參蛋白必須滿足在各個樣品中表達(dá)水平相對穩(wěn)定,且表達(dá)量不受待測蛋白質(zhì)的影響。在進(jìn)行 Western blotting 實(shí)驗時,我們會將待檢測蛋白和內(nèi)參蛋白一起加載到同一個凝膠或膜片上,并通過檢測它們的比例來計算待測蛋白的表達(dá)量。
內(nèi)參抗體通常用于檢測內(nèi)參蛋白,而不是作為待檢測蛋白的主要抗體。例如,β-actin、GAPDH等常見內(nèi)參蛋白都有相應(yīng)的抗體可以使用,這些抗體具有良好的可控性和快速性,可以很好地輔助實(shí)驗的標(biāo)準(zhǔn)化。
標(biāo)簽抗體和內(nèi)參抗體主要區(qū)別在于在 Western blotting 實(shí)驗中的使用目的和方式。標(biāo)簽抗體通常作為檢測實(shí)驗的主要抗體,用于檢測目標(biāo)蛋白質(zhì)的存在與否;而內(nèi)參抗體則用于標(biāo)準(zhǔn)化實(shí)驗過程中某些步驟,作為比較基準(zhǔn)。
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