沙門氏菌單克隆抗體pcr檢測方法
日期:2023-05-26 11:00:25
沙門氏菌是引起食物中毒的主要病原體之一。單克隆抗體是一種高特異性、高親和力的抗體,適用于沙門氏菌的檢測。本文將介紹沙門氏菌單克隆抗體PCR檢測方法。
1、實驗材料:
(1) 沙門氏菌菌株和培養基
(2) LB培養基(tryptone 10 g/L,yeast extract 5 g/L, NaCl 10 g/L)
(3) PCR反應試劑盒(包括Taq DNA polymerase, dNTPs,引物等)
(4) 單克隆抗體和探針(華美生物公司提供)
(5) 蛋白質電泳裝置、膜傳輸裝置、ECL檢測試劑(cusabio公司提供)
2、實驗步驟:
(1) 培養沙門氏菌菌株
將沙門氏菌菌株接入LB培養基中,在37°C下靜培養12h至對數生長期,然后采集細菌進行下一步操作。
(2) 制備單克隆抗體和探針
將選擇出的沙門氏菌特異性的抗原作為免疫原,注入小鼠體內制備單克隆抗體。同時,根據已知的沙門氏菌基因序列設計探針。
(3) 單克隆抗體的電泳檢測
將制備好的單克隆抗體通過蛋白質電泳裝置進行電泳檢測,檢測結果顯示單克隆抗體的特異性和親和力。
(4) 單克隆抗體的Western blot檢測
將制備好的單克隆抗體進行Western blot檢測,確定其特異性和親和力。
(5) 沙門氏菌的PCR檢測
將沙門氏菌DNA作為模板,使用引物進行PCR擴增。PCR反應條件為:94°C預變性2min,95°C變性1min,55°C退火1min,72°C延伸80s,共35個循環。PCR擴增產物通過凝膠電泳檢測,分離出目標片段。
(6) 探針的ECL檢測
將PCR產物轉移到膜上,再使用探針進行ECL化學發光檢測,能夠對PCR產物進行檢測,并能夠確定其沙門氏菌的特異性。
3、結果分析
經過上述步驟后,能夠得到沙門氏菌單克隆抗體PCR檢測的結果。如果PCR擴增產物在目標大小范圍內,并且通過探針的ECL發光檢測顯示特異性,則證明樣品中含有沙門氏菌DNA。
本文介紹了沙門氏菌單克隆抗體PCR檢測方法,該方法具有高靈敏度和特異性,適用于沙門氏菌的檢測。
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