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雙特異性抗體的制備方法有哪些?

日期:2023-05-22 15:02:13


      雙特異性抗體(bispecific antibody, BsAb)能同時結合兩種不同抗原,并促進它們的相互作用從而實現某種生物學效應的抗體分子。與傳統單克隆抗體相比,雙特異性抗體在治療腫瘤、感染等疾病方面具有顯著的優勢。目前,已經開發出多種制備雙特異性抗體的方法,下面介紹其中一些常見的方法。
 
1、隨機雜交法

      隨機雜交法是利用人工構建的DNA庫進行大規模高通量篩選的方法,該方法由萊納·布魯曼等人于1988年首次提出。具體操作流程為:首先構建包含兩個或多個基因區域的DNA片段,然后將它們隨機重組并表達,最后通過多輪的高通量篩選來挑選具有特定生物活性的雙特異性抗體分子。
 
      由于該方法的隨機性和高通量性,因此可以得到大量和多樣化的雙特異性抗體,但同時也存在著低表達量和高度異質性的缺點。
 
2、二元系統法

      二元系統法是將兩種不同的單抗的變異區段(VH和VL)合并在一起,構建出含有兩種單抗特異性和交叉反應特征的重組抗體。其中一種單抗(常規單抗)仍然保持其原有的特異性,另一種單抗(變異單抗)則發生功能性改變,具有了新的識別能力。
 
      二元系統法可以通過基因工程方法和化學偶聯等方式來實現,具有較強的靈活性和高度可控性。其中最常用的方法是基因工程技術,可以通過直接連接VH和VL、插入一個銜接肽或者使用重鏈類固醇和輕鏈類固醇融合等方式來制備雙特異性抗體。
 
3、單鏈抗體碎片拼接法

      單鏈抗體碎片拼接法是將兩個單鏈抗體拼接在一起,其中一個單鏈抗體的C端被連接到另一個單鏈抗體的N端,從而形成兩個不同的可變區結構,能夠同時識別兩個靶點。該方法可以通過重組DNA技術進行實現。
 
      由于單鏈抗體碎片具有較小的分子量和更好的滲透性,因此可以提高進入細胞和穿透組織的效率,是制備雙特異性抗體的重要方法之一。
 
4、地位特異性變異區重組法

      地位特異性變異區重組法是在單克隆抗體的基礎上,通過人工設計或者隨機化進化等方式,利用生物學優勢篩選出具有多重識別能力的抗體分子。該方法通常使用重組DNA技術,并結合重組蛋白表達技術、流式細胞分選等手段進行實現。
 
      以上是一些制備雙特異性抗體的常見方法,這些方法各有優缺點,并且適用的范圍和應用場景也不盡相同。在選擇方法時,需要根據實驗需求和具體情況綜合考慮。


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