wb抗體洗脫重新孵育方法及注意事項

日期：2023-04-27 15:54:42

WB抗體洗脫重新孵育是免疫印跡技術（Western Blotting）改進方法。該方法通過洗脫已經孵育的抗體，可以將同一張膜用于重復檢測多個靶蛋白，從而提高檢測效率和節省成本。以下是關于WB抗體洗脫重新孵育的詳細介紹。

方法

在WB實驗中，通常需要對已經孵育膜進行洗脫處理，然后再次孵育使用。具體操作如下：

（1）將試劑盒中的抗體洗脫液加熱至60℃左右；

（2）將已經孵育的膜放入洗脫液中，輕輕搖動或震蕩10-15分鐘；

（3）取出膜，用PBS緩沖液洗滌3次，每次5分鐘；

（4）用TBST緩沖液預處理膜，孵育10-15分鐘；

（5）按照常規方法孵育使用。

注意事項

（1）抗體洗脫液應充分加熱，以確保最大程度地洗脫抗體。同時，液體的溫度不宜過高，避免膜的破裂和損壞。

（2）洗脫后的膜必須徹底清洗，并用TBST緩沖液進行預處理，以去除殘留抗體和保護膜的完整性。

（3）在使用抗體洗脫液時，應注意避免過度搖晃或震蕩樣品，以免引起膜的移動、泡沫的產生等影響實驗結果的不良狀況。

（4）抗體洗脫液可以反復使用，但需要經常更換，以免造成交叉污染和影響實驗結果的準確性。

應用

WB抗體洗脫重新孵育方法可以極大地提高實驗的效率和節省實驗成本。目前已廣泛應用于分子生物學、細胞生物學、生物醫學等領域的相關研究中。同時，該方法具有靈敏、特異、快捷等特點，為科學家研究細胞信號通路、生命進化等方面提供了強有力的技術支持。