篩選雜交瘤細(xì)胞通過選擇性培養(yǎng)而獲得雜交細(xì)胞系中，僅少數(shù)能分泌針對(duì)免疫原的特異性抗體。一般在雜交瘤細(xì)胞布滿孔底1／10面積時(shí)，即可開始檢測(cè)特異性抗體，篩選出所需要的雜交瘤細(xì)胞系。
　
　  檢測(cè)抗體的方法應(yīng)根據(jù)抗原的性質(zhì)、抗體的類型不同，選擇不同的篩選方法，一般以快速、簡(jiǎn)便、特異、敏感的方法為原則。
　　常用的方法有:
　　1.　ELISA用于可溶性抗原(蛋白質(zhì))、細(xì)胞和病毒等McAb的檢測(cè)。
　　2.　RIA用于可溶性抗原、細(xì)胞McAb的檢測(cè)。
　　3.　FACS(熒光激活細(xì)胞分類儀)用于檢查細(xì)胞表面抗原的McAb檢測(cè)。
　　4.　IFA用于細(xì)胞和病毒McAb的檢測(cè)。

可靠的篩選方法必須在融合前建立，避免由于方法不當(dāng)貽誤整個(gè)篩選時(shí)機(jī)。

1．抗體效價(jià)的鑒定
　　根據(jù)抗原性質(zhì)的不同，抗體效價(jià)的測(cè)定方法不同。一般可溶性抗原可采用雙向瓊脂擴(kuò)散的方法，顆粒性抗原可采用凝集實(shí)驗(yàn)的方法。
　　在標(biāo)記免疫分析中，所用的抗體最終稀釋度稱為抗體的工作濃度，抗體在應(yīng)用前應(yīng)進(jìn)行效價(jià)測(cè)定。在放射免疫分析中，抗體的滴度(titer)有其特定的定義，是指結(jié)合50%標(biāo)記抗原時(shí)抗血清的稀釋度。
　　抗體的滴度以在反應(yīng)液中的稀釋度表示。在實(shí)際工作中抗體的量可明顯的影響試驗(yàn)的靈敏度和準(zhǔn)確性。抗體過多可使試驗(yàn)的靈敏度下降，而抗體過少時(shí)試驗(yàn)的靈敏度雖高但重復(fù)性和準(zhǔn)確度較差。為選擇適當(dāng)?shù)目贵w稀釋度，可用連續(xù)稀釋法確定(圖4 -1)。將抗血清用加倍稀釋法配成不同稀釋度的溶液，然后分別加一定量的標(biāo)記抗原，共同溫育后分離結(jié)合的標(biāo)記抗原抗體復(fù)合物和未結(jié)合的標(biāo)記抗原。當(dāng)B / F = 1，即B / T = 50%時(shí)的抗體稀釋度即為最佳的稀釋度。如只測(cè)量結(jié)合部分(B)，而且以B / B0 為縱坐標(biāo)，以劑量為橫坐標(biāo)作劑量反應(yīng)曲線，則B / T = 30%～50%時(shí)抗體的稀釋倍數(shù)即為最佳的抗體稀釋度。抗體(抗血清)的最佳稀釋度(即抗體的滴度)越高，表明抗體的質(zhì)量越好。
　　2． 體特異性鑒定
　　抗體的特異性鑒定一般采用相似的抗原與待鑒定抗體反應(yīng)。如果出現(xiàn)交叉反應(yīng)，說明有交叉抗體的存在。此時(shí)，可用相應(yīng)抗原吸收，以提高抗體的特異性。
　　1）抗體特異性的表示方法及其計(jì)算：抗體的特異性以交叉反應(yīng)率表示，其計(jì)算方法如下：交叉反應(yīng)率 = [待測(cè)抗原50%結(jié)合時(shí)的濃度] / [待鑒定類似物50%結(jié)合時(shí)的濃度]·100%
　　應(yīng)該注意的是，交叉反應(yīng)曲線的橫坐標(biāo)應(yīng)以物質(zhì)的分子濃度(mol / L)表示。因?yàn)榭乖?抗體反應(yīng)應(yīng)服從于質(zhì)量作用定律，它們的結(jié)合不論是單價(jià)的還是多價(jià)的，都只能與分子數(shù)有關(guān)，即都以分子數(shù)為基礎(chǔ)。因此，反應(yīng)物和產(chǎn)物都應(yīng)以分子濃度表示。Miller和Vaides比較了用分子濃度與質(zhì)量濃度時(shí)的幾種地高辛代謝產(chǎn)物的交叉反應(yīng)率，結(jié)果發(fā)現(xiàn)二者有較大的差別，從而證明應(yīng)以物質(zhì)的分子濃度表示交叉反應(yīng)率的重要性。
　　2）提高抗體特異性的方法：抗體的特異性是標(biāo)志抗體優(yōu)劣的重要指標(biāo)。為提高抗體的特異性可用下列方法制備抗體。
　　用抗原的某些特異性分子片段免疫動(dòng)物，這樣得到的抗體較用全分子免疫動(dòng)物得到的抗體特異性強(qiáng)。如用hCG的β亞單位免疫動(dòng)物可得到對(duì)hCG高特異性的抗體。但用這種方法由于使用的抗原分子較小，所以抗體的產(chǎn)生比較困難。
　　用親和層析方法進(jìn)一步純化。這種方法費(fèi)時(shí)費(fèi)力，而且收獲率也較低，所以因成本高而比較少用。
　　用單克隆抗體代替抗血清，但單克隆抗體的反應(yīng)強(qiáng)度不如抗血清，而且單克隆抗體所識(shí)別的抗原濃度與多克隆抗體(抗血清)所識(shí)別的抗原濃度也不完全相同。Yalow指出，由于在標(biāo)記免疫分析中所使用的是充分稀釋的抗血清，所以僅一小部分具有最高反應(yīng)能力的抗體與抗原結(jié)合。因此，非均一抗體有可能提供比單克隆抗體更高的靈敏度。而單克隆抗體可提供更高的特異性。因而在選擇應(yīng)用的抗體時(shí)，應(yīng)根據(jù)對(duì)實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)的要求而定。如要求實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)有高度的特異性，單克隆抗體較多克隆抗體好；如對(duì)特異性的要求不很高，而要求有較高的反應(yīng)強(qiáng)度和靈敏度，則多克隆抗體有其一定的優(yōu)越性。
　　3） 抗體純度鑒定
　　抗體的純度鑒定可采用區(qū)帶電泳的方法。若只出現(xiàn)一條蛋白區(qū)帶說明抗體純化已達(dá)到要求。
　　4） 抗體親和力鑒定
　　抗體的親和力（affinity）是指抗原與抗體結(jié)合的牢固程度。親和力越大表示抗體的結(jié)合反應(yīng)越快，抗原抗體復(fù)合物越不易解離。親和力的大小是由分子的大小、抗體結(jié)合的位點(diǎn)、以及抗原決定簇之間的立體構(gòu)型的適合程度決定的。親和力決定實(shí)驗(yàn)方法的靈敏度。因此，親和力是評(píng)價(jià)抗體質(zhì)量的重要指標(biāo)。
　　抗體親和力的大小以親和常數(shù)表示，親和常數(shù)就是表示抗血清中抗體分子的濃度。可用飽和曲線法進(jìn)行計(jì)算。
　　飽和曲線法 飽和曲線法是用米氏公式計(jì)算親和常數(shù)。以結(jié)合部分(B)為縱坐標(biāo)，抗原濃度(M / L)為橫坐標(biāo)作圖，為一條飽和曲線。取定量的一定稀釋度的抗體，分別加入逐漸增加的抗原里，可使抗體的結(jié)合達(dá)到飽和，求出抗體飽和程度為50%時(shí)的游離抗原濃度，其倒數(shù)即為該抗體在此稀釋度下的親和常數(shù)。分別列出測(cè)定物的濃度、結(jié)合率、標(biāo)記物和標(biāo)準(zhǔn)品的化學(xué)總量、標(biāo)準(zhǔn)物的總濃度(M / L)以及它的結(jié)合濃度(B, M / L)，然后作圖求出F(50%飽和)的濃度，其倒數(shù)即為親和常數(shù)(K)。
　　K = [AgAb] / [Ag][Ab]， [AgAb] = B [Ab] = F
　　當(dāng)B / F = 1時(shí)，則 K = 1 / [Ag] = 1 / F (50%飽和)
　　親和常數(shù)K的單位及其意義：親和常數(shù)K的單位是L / M，其意義是1克分子抗體需要稀釋多少升能夠達(dá)到50%的結(jié)合率。親和常數(shù)越大，稀釋的倍數(shù)越高，所用的抗體量越小。