我國在加強開展干血斑HIV核酸檢測
日期:2012-07-03 08:21:35
病毒體的核酸檢測,目前主要依靠PCR技術,隨著PCR的普及,很多病毒都可以通過這種方法檢出,其具有窗口期短,準確性、特異性高等特點。這種技術對樣本的選擇比較多樣化,包括液體血液、干血斑、組織細胞等均可以作為其樣本。
近年來,國外不斷有應用濾紙片干血斑來檢測HIV抗體、HIVDNA及RNA的報道,濾紙片是外周血采集和運輸的極好載體,外周血滴在濾紙片上可以制成濾紙片干血斑,有很好的生物穩定性,并且方便貯存與運輸。我國是一個地域十分廣闊的大國,各地經濟科技實力差異較大,為了在我國開展與推廣這項技術,國家艾滋病參比實驗室(NARL)從2004年開始,應用濾紙片干血斑檢測HIV抗體、DNA、基因分型與病毒載量測定等方面的研究,并于2012年4月舉辦了第一次“全國濾紙片干血斑HIVDNA檢測技術培訓班”。
研究表明血樣的濾紙片干血斑樣本與血漿樣本用EIA法檢測,符合率為100%,相關性為0.919;兩種樣本經WB確認,條帶完全一致的占總數的42.85%,其中主要條帶(至少有2條env帶出現,或至少1條env和p24帶同時出現)的符合率為100%。其次,應用濾紙片干血斑檢測HIV前病毒DNA,結果發現, 在重復2-3次的前提下,濾紙干血斑樣本HIV感染基因診斷敏感度與全血樣本比較無統計學顯著性差異。22份兩種陰性樣本特異性均為100%(CI 95.93%100%)。18對全血和濾紙干血斑樣本HIV基因診斷一致性分析,符合率94%。進一步又研究了應用濾紙片干血斑樣本用于HIV基因序列測定和亞型分析,結果發現,干血斑樣本與全血樣本DNA PCR產物亞型分析一致,氨基酸序列比對同義和非同義替換比例、位置和類型基本一致。
鑒于上述研究,為保證在實際操作過程中實驗室的檢測質量,國家艾滋病參比實驗室制訂了能力驗證計劃,計劃包括制備能力驗證盤并定期提供開展此工作的各實驗室和對其檢測結果進行評價。目前,全國已有15個實驗室參加了技術培訓, 包括上海維斯塔(www.i-vst.com)的合作單位上海公共衛生中心實驗室在內的13個實驗室參加并完成了國家艾滋病參比實驗室的第一次能力驗證活動。