Nat Methods:DNA/RNA分子定量新技術
日期:2011-11-23 08:37:37
近日來自瑞典醫科大學卡羅琳斯卡醫學院的研究人員開發了一種分子定量新方法,相關研究論文在線發表在11月20日《自然方法》(Nature Methods)雜志上。
領導這一研究的是卡羅林斯卡研究院的生物化學和生物物理學家Sten Linnarsson和生命科學與營養學系Jussi Taipale教授。
DNA和RNA是細胞中遺傳信息的重要承載者和傳遞者,實現對不同種類的DNA和RNA分子的精確定量成為了分子生物學一項基礎任務。因此,改良這些分子檢測技術對了解正常細胞和癌細胞中的生理和病理機制具有非常重要的意義。
由于目前的技術尚無法直接對復合物中的少量個別分子進行檢測,研究人員常采用擴增技術來獲得大量拷貝分子以放大信號。然而這種擴增方法卻很難實現精確追蹤模板初始分子數。其原因在于相同分子擴增獲得的所有拷貝彼此無法區分,因而不能確定每個初始分子的具體拷貝次數。
在這篇文章中,研究人員開發出一種新方法對這些分子進行人工標記,使得生成的拷貝能夠很容易區分出它們的初始分子。隨后研究人員利用一種可并行讀取數百萬DNA片段的新型高通量測序儀高效完成了對這些分子的定量。目前采用的多種方法均只能檢測樣品間的相對差異,新技術原理非常的簡單,卻可實現對細胞樣品中的分子精確定量。
Jussi Taipale教授的研究團隊隨后利用這一技術完成了對細胞中數千種不同mRNA分子的同步定量檢測,檢測數據表明新技術顯示了比當前類似常用技術更高的準確性。高效準確的計數mRNA分子具有重要的意義,通過定量它們的豐度即可了解到靶細胞中的基因表達情況。Taipale實驗室長期從事細胞生長調控研究,他們希望能借助于這一技術來了解在正常及癌變等異常情況下細胞中的基因活性表達。
新技術在對少量細胞進行分子定量方面顯示了特別的優勢,Sten Linnarsson計劃將其應用到對單細胞的分子定量中去——是一個令人感到興奮且具有挑戰性的工作。此外,研究人員表示新技術的原理也可適用于改良其他重要的檢測技術,幫助開發出更高精確度的基因組測序技術。
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