印跡技術(shù)

1975，Edwen Southern提出分子印跡概念。

概念：將存在于凝膠中的生物大分子轉(zhuǎn)移（印跡）于固定化介質(zhì)上并加以檢測分析的技術(shù)。目前主要應用于DNA,RNA，蛋白質(zhì)的檢測。

蛋白質(zhì)免疫印跡法

Western blotting: 免疫印跡法是檢測蛋白質(zhì)混合溶液中某種特定目的蛋白質(zhì)的定性方法，也可以作為確定同一蛋白質(zhì)在不同細胞或者同一種細胞不同條件下的相對含量的半定量方法。由于其檢測往往需要抗體，所以也被稱為免疫印跡技術(shù)。

應用

1 檢測樣品中特異蛋白存在與否

2 細胞中特異蛋白的半定量分析

3 蛋白質(zhì)分子相互作用的研究

實驗操作

1 細胞裂解物的準備；

2 細胞裂解物的蛋白定量；

3 細胞裂解物的SDS-PAGE；

4 蛋白質(zhì)的轉(zhuǎn)移；

6 目的蛋白質(zhì)的檢測。

免疫印跡只能檢測目的蛋白的相對含量

測定相對含量時，需要內(nèi)參照

選擇合適的反應條件：SDS-PAGE膠濃度；轉(zhuǎn)移膜的選擇；轉(zhuǎn)移時間的選擇

注意電極的正負極

抗體反應時，注意驅(qū)除反應袋內(nèi)氣泡

操作要輕柔。