早期凋亡檢測(cè)的新工具
日期:2011-07-28 15:46:05
細(xì)胞膜的重排發(fā)生在凋亡的早期。在許多凋亡細(xì)胞中,這種重排導(dǎo)致磷脂酰絲氨酸(PS)從細(xì)胞膜的內(nèi)側(cè)翻轉(zhuǎn)到細(xì)胞膜的表面,暴露在細(xì)胞外環(huán)境中。這一事件目前主要通過(guò)Annexin V來(lái)檢測(cè)。Annexin V是一種Ca 2+依賴的磷脂結(jié)合蛋白,在Ca 2+存在的情況下,與PS有很高的親和力,可與凋亡細(xì)胞膜上外翻的PS相結(jié)合。熒光(如GFP、FITC)標(biāo)記的Annexin V一旦與凋亡細(xì)胞結(jié)合,就可以通過(guò)熒光顯微鏡觀察到。
IMGENEX開發(fā)的pSIVA(Annexin XII)也是一種基于Annexin的極性探針,可用于凋亡或其他形式細(xì)胞死亡的時(shí)空或激酶分析。pSIVA結(jié)合是可逆的,這樣研究人員就能夠檢測(cè)到瞬時(shí)的PS外翻,這與正常的生理過(guò)程以及可逆的凋亡事件相關(guān)聯(lián)。
pSIVA與一種靈敏的極性染料IANBD結(jié)合,只有當(dāng)pSIVA與細(xì)胞膜結(jié)合時(shí),才發(fā)出熒光。與不可逆的Annexin V結(jié)合相比,這種膜結(jié)合依賴的熒光以及可逆結(jié)合性質(zhì)是技術(shù)上的一大進(jìn)步,為凋亡通路和細(xì)胞存活帶來(lái)了更多信息。
pSIVA vs. Annexin V
|
pSIVA-IANBD |
Annexin V-FITC |
無(wú)毒性 |
√ |
√ |
FACS |
√ |
√ |
檢測(cè)早期凋亡 |
√ |
√ |
活細(xì)胞成像 |
√ |
|
活體成像 |
√ |
|
高通量篩選 |
√ |
|
無(wú)需洗滌 |
√ |
|
活力評(píng)估√ |
√ |
|
pSIVA-IANBD熒光信號(hào)的短暫出現(xiàn)伴隨著瞬時(shí)的PS外翻。當(dāng)PS回到細(xì)胞膜內(nèi)側(cè),pSIVA-IANBD將被釋放到培養(yǎng)基中,熒光消失。至于瞬時(shí)的PS外翻,這被認(rèn)為是正常的事件,不過(guò)仍有待進(jìn)一步的研究。
pSIVA探針可應(yīng)用于毒理學(xué)檢測(cè)、凋亡通路的高通量篩選、共聚焦顯微鏡、流式細(xì)胞儀以及凋亡的活體成像研究。
IMGENEX公司致力于開發(fā)和生產(chǎn)人體生理和疾病狀態(tài)的研究試劑、人類疾病的診斷試劑和治療試劑。這些新的試劑包括抗體、基因、蛋白表達(dá)系統(tǒng)、用于人類功能基因組研究的各種細(xì)胞和組織的陣列。涉及領(lǐng)域包括癌癥、凋亡、信號(hào)途徑、細(xì)胞衰老、代謝和感染等疾病。
上一篇: 最新基因組研究進(jìn)展