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Your Good Partner in Biology Research

捕獲低豐度蛋白的新技術(二)

日期:2011-06-03 08:12:17

在加拿大的多倫多大學,Andrei Drabovich和Eleftherios Diamandis采用另一種不同的方法來對付低豐度蛋白。他們利用組合肽段文庫(CPL)來開發分析,這項成果發表在2010年3月的《Journal of Proteome Research》上。

肽段文庫幫助標準化樣品中存在的蛋白豐度,從而富集低豐度蛋白,而排除高豐度蛋白。之后,樣品可通過質譜分析。這聽上去有些復雜,不過記住一點,文庫中有一種配體能與特異蛋白結合。Drabovich解釋:“我們假設有兩種特異蛋白:一種非常高豐度的蛋白和一種非常低豐度的蛋白。當我們將這種組合文庫加入樣品時,這些配體與蛋白結合,特異配體的拷貝數相同。然而,高豐度蛋白將過飽和配體,因此大部分都不會結合,而低豐度蛋白將幾乎全部與配體結合,因為配體數量是相同的。”之后,經過最后一步的洗脫,研究人員將得到相同數量的高豐度和低豐度蛋白。

利用這種方法,Drabovich尋找了血清、癌細胞裂解液、以及卵巢癌和前列腺癌患者血液中的低豐度蛋白,試圖找到其他方法無法發現的蛋白標志物。

Drabovich談到:“這種技術可回答多個問題,找到診斷、預后和監控藥物反應的生物標志物。這是整個探索過程的第一步。”盡管組合肽段文庫的理念不能分離某一種特定蛋白,但是能夠富集它們,之后再用質譜或其他方法進行分析。

利用這種方法,他們在卵巢癌腹水中鑒定出總共484個獨特蛋白,其中216個為低豐度蛋白。其中74個蛋白之前未曾描述過。CPL的處理使得鑒定出的低豐度蛋白要多得多,并為多反應監測(MEM)分析的開發提供了重要的信息。利用多反應監測,他們確定了一組卵巢癌腹水中五種蛋白的相對量。


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