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免疫電泳實驗

日期:2010-08-13 16:27:19

免疫電泳(immunoelectrophoresis )是將電泳和瓊脂擴散結合起來,用于分析抗原組成的一種定型方法,具有靈敏快速的優點。該實驗可分為如下兩個步驟:

1.電泳 將待檢的可溶性物質在瓊脂板上進行電泳分離。由于各種可溶性蛋白分子的大小、質量與所帶電荷不同,在電場的作用下,其帶電分子的運動速度具有一定的規律,因此通過電泳能夠把混合物中的各種不同成分分離開。

2.瓊脂擴散 電泳后在瓊脂槽中加入相應抗血清,然后置濕盒內進行雙擴散。當抗原與抗體相遇且比例適合時,可形成不溶性復合物,出現特異性沉淀線,根據沉淀線的數量和位置,可鑒定分析各種抗原成分及其性質。

【材料】

1.抗原:正常人血清;抗體:兔抗人血清。

2.1% 離子瓊脂(用離子強度 0.05 、pH8.6 的巴比妥緩沖液配制)。

3.載玻片、直徑 3mm 的打孔器、2 × 6 × 6 聚苯乙烯塑料條、微量加樣器、電泳儀、吸管等。

【方法】

1.制瓊脂板 載玻片放于水平臺面上,將塑料條放置于玻片中央,吸取 4ml 熱熔的 1% 離子

瓊脂于其上,待凝固后,取出塑料條,即制成瓊脂槽。再按圖 6-2 打孔。

2.加樣 用微量加樣器往孔中加正常人血清。

3.電泳 電壓 4V/cm ,電泳 1.5 小時。

4.瓊脂擴散 在瓊脂槽內加入兔抗人血清,使其充滿槽內,置濕盒內 3 7 ℃ 擴散 24 小時,觀察結果。

【結果觀察】

在瓊脂槽的兩邊出現相對稱的弧形沉淀線。

【注意事項】

1.電泳擴散后可直接在黑色背景下,用斜射光觀察。

2.電泳時,搭橋應完全緊密接觸,以免因電流不均而發生沉淀線彎曲。


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