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Nature Methods發(fā)布CRISPR新技術(shù):CRISPR-X

日期:2016-11-02 09:20:46

 斯坦福大學(xué)遺傳學(xué)系,藥理學(xué)系的幾位學(xué)者合作,開發(fā)出了一種為原位蛋白質(zhì)工程重利用體細(xì)胞超突變的新技術(shù)——  CRISPR-X ,這將能幫助科學(xué)家們創(chuàng)建復(fù)雜的原始遺傳突變文庫,分析完善蛋白質(zhì)工程。

 

這一研究成果在線公布在1031日的Nature Methods雜志上,文章的通訊作者是斯坦福大學(xué)Michael C Bassik副教授,他曾參與研發(fā)多項(xiàng)CRISPR新技術(shù),比如前年研發(fā)的SunTag,這是一套分子掛鉤,其能夠?qū)⒍鄠€拷貝的生物活性分子掛到可用來靶向一些基因或其他的分子的蛋白質(zhì)支架上,利用SunTag能增加CRISPR的變化。

 

目前通過定向進(jìn)化法分析蛋白功能,進(jìn)行蛋白質(zhì)工程研究受限于整體誘變,或DNA文庫構(gòu)建方面的技術(shù)問題。這篇文章針對于此,研發(fā)出了一種為原位蛋白質(zhì)工程重利用體細(xì)胞超突變的新技術(shù):CRISPR-X

 

研究人員催化激活休眠的 dCas9,令其召集攜帶MS2修飾sgRNAs的胞嘧啶脫氨酶(cytidine deaminaseAID)突變,從而能特異化誘變內(nèi)源靶標(biāo)(限制脫靶傷害)。這樣就能生成多個不同的點(diǎn)突變文庫,同時靶向多個基因組位點(diǎn)。

 

為了驗(yàn)證這種方法,研究人員誘變了GFP,篩選了光譜轉(zhuǎn)移突變,比如EGFP,而且他們還突變了癌癥治療藥物萬珂(Bortezomib)的靶標(biāo)——PSMB5Bortezomib是目前批準(zhǔn)上市的唯一治療惡性腫瘤的蛋白酶體抑制劑,能特異性抑制哺乳動物細(xì)胞內(nèi)26S蛋白酶體的類胰凝乳蛋白酶。

 

結(jié)果他們從中找到了引發(fā)Bortezomib耐藥性的已知和全新的突變。同時研究人員還利用超活化AID突變,誘變了其轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)上游和下游的位點(diǎn)。

 

這些研究均表明 CRISPR-X 是一種強(qiáng)大的工具,能幫助科學(xué)家們創(chuàng)建復(fù)雜的原始遺傳突變文庫,分析完善蛋白質(zhì)工程。

 

中科院上海生命科學(xué)院/上海交大醫(yī)學(xué)院健康科學(xué)研究所的研究團(tuán)隊(duì)十月十日在Nature Methods雜志上發(fā)表了一項(xiàng)重要研究成果。他們將活化誘導(dǎo)胞嘧啶核苷脫氨酶(AID)與CRISPR-dCas9融合起來,打造了有效的遺傳多樣化工具,以便對功能性變異進(jìn)行高通量篩選。

 

哈佛大學(xué)的科學(xué)家們以CRISPR為基礎(chǔ)打造出了一個定向的RNA定位法——CRISPR-DisplayCRISP-Disp)。他們利用失去催化活性的dCas9,將整合在sgRNA中的大片段RNA帶到特定DNA位點(diǎn)。這個研究RNA功能的強(qiáng)大工具發(fā)表在Nature Methods雜志上,文章通訊作者是RNA領(lǐng)域的著名青年科學(xué)家John Rinn博士,他曾被評為2009年美國國內(nèi)撼動科學(xué)界的青年英才。

 

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