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Cell:CRISPR/Cas9再獲重要突破

日期:2016-09-05 09:20:37

 Whitehead研究所的科學家們首次對頂復門(Apicomplexa)生物進行了全基因組篩選。這項重要的研究成果于九月二日發表在Cell雜志上。頂復門的單細胞寄生蟲會引起瘧疾、巴貝斯蟲病、隱孢子蟲病和弓形蟲病,但我們對這些家伙還知之甚少。

 

“我們一直沒什么辦法研究頂復門寄生蟲所有基因的功能,”Whitehead研究所的Sebastian Lourido說。“現在我們找到了一個好方法。這種方法可以研究寄生蟲的各種問題,從獲取營養、應答免疫壓力到遺傳學互作,是相關領域的一次重要飛躍。”

 

弓形蟲(Toxoplasma gondii)是一種寄生在細胞內的病原體,可以感染包括人在內的幾乎所有的溫血動物。弓形蟲感染引起的肺部疾病對新生兒、兒童和存在免疫力低下人(AIDS、骨髓移植、器官移植等)特別危險。感染了弓形蟲的孕婦會將這種寄生蟲傳給胎兒,可能導致流產或死產,影響孩子的大腦、眼睛和聽力。

 

另一種頂復門寄生蟲更令人頭疼,那就是惡性瘧原蟲(Plasmodium falciparum)。根據世界衛生組織WHO的統計,2015年有超過四十萬人死于惡性瘧原蟲引發的瘧疾。弓形蟲與惡性瘧原蟲親緣關系很近,可以作為研究惡性瘧原蟲的模型。然而弓形蟲研究發展得并不順利,因為人們無法快速有效地敲低基因。在頂復門寄生蟲中RNA干擾(RNAi)沒什么活性,隨機誘變又難以解讀,遺傳雜交也難以實施。

 

此外,用CRISPR/Cas9進行基因組編輯也并不好做,因為Cas9酶對弓形蟲基因組毒性太大。CRISPR是規律成簇的間隔短回文重復(Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats)的縮寫。CRISPR與內切酶Cas9是一對好基友,細菌依靠它們組成的防御系統對抗外來侵略者。CRISPR/Cas9能夠在引導RNA的指引下,靶標并切割入侵者的遺傳物質。2012年研究者們利用這一特點,將CRISPR系統發展成了強大的基因組編輯工具。該系統使用簡單而且擴展性強,很快便成為了生物學領域最耀眼的明星。

 

為了克服Cas9對弓形蟲基因組的毒性,研究人員開發了一種“誘餌”sgRNA。研究顯示,這種誘餌能夠有效降低Cas9的活性。研究人員用這種溫和版CRISPR/Cas9系統逐個破壞弓形蟲的8,158個基因,進而研究它們各自的功能。

 

他們通過這種方法鑒定了與寄生蟲適應人類細胞有關的二百個基因,這些基因是頂復門寄生蟲所共有的。其中一個基因編碼的CLAMP蛋白,對寄生蟲入侵宿主細胞有很大的影響。為了進一步分析這個蛋白的作用,研究人員在惡性瘧原蟲中敲低了這個蛋白。他們發現,缺乏功能性的CLAMP瘧原蟲就無法在紅細胞中生長。研究人員指出,雖然全基因組CRISPR/Cas9系統可以很好的作用于弓形蟲,但這種策略并不適合惡性瘧原蟲。正因如此,弓形蟲將是研究瘧疾的重要模型。

 

CRISPR/Cas9是精確改寫基因組的便捷工具。不過,在難轉化的植物中進行CRISPR/Cas9基因組編輯在技術上還有一定的挑戰,往往會產生令人擔憂的轉基因中間產物。中科院遺傳與發育生物學研究所的科學家們解決了這個問題。 八月二十五日他們在Nature Communications雜志上發表文章,向人們展示了無轉基因的CRISPR/Cas9基因組編輯方法。文章通訊作者是中科院遺傳與發育生物學研究所的高彩霞(Caixia Gao)研究員。

 

PRKAG2心臟綜合征是由PRKAG2基因突變造成的常染色體顯性遺傳疾病,包括家族性心室預激、傳導系統病變及心肌肥厚,患者往往會出現室性心動過速和進程性心力衰竭。這種疾病目前還很難治療,需要進行心臟移植。武漢大學、中科院和復旦大學的研究人員建立了PRKAG2心臟綜合征小鼠模型,并通過CRISPR/Cas9基因組編輯成功校正了小鼠的PRKAG2突變。這項研究最近發表在Cell Research雜志上。

 

諾如病毒在生活中很常見,每年都會在學校、酒店和游輪中造成疫情,使患者出現腹瀉、嘔吐、胃痙攣等癥狀。不過,科學家們對這種病毒的致病機制一直知之甚少,因為這種病毒無法在實驗室中培養。華盛頓大學的研究人員通過CRISPR/Cas9技術鑒定了諾如病毒入侵細胞所需的蛋白。研究顯示,用CRISPR/Cas9敲低CD300lf基因的時候,諾如病毒就不能感染細胞了。

 


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