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通過游離DNA來推斷基因表達

日期:2016-08-31 08:55:23

 奧地利格拉茨醫科大學的研究人員發現,在血漿中循環的游離DNAcfDNA)能夠為預測基因表達提供線索。這項成果于周一發表在《Nature Genetics》上。

 

通過挖掘活性或非活性轉錄起始位點上游的核小體差異,奧地利的研究人員開發出一種方法,根據cfDNA的讀取深度模式來估計基因表達。他們利用100多名健康個體的血液樣本建立了這種方法,并將其應用在數百名癌癥患者的樣本上。

 

“我們利用全基因組測序數據來確定基因表達的狀況,”文章的通訊作者,格拉茨醫科大學的人類遺傳學研究人員Michael Speicher寫道。“對于那些釋放DNA進入循環系統的細胞,我們的研究帶來了新觀點,并擴展了現有的cfDNA分析選項。”

 

研究小組指出,漂浮在血液中的許多cfDNA代表了凋亡細胞的遺傳物質,包括核小體中與蛋白質復合物配對的DNA。因此,研究人員推斷,利用DNA讀取深度應該能夠揭示與基因轉錄活性相關的核小體印跡。之前的微球菌核酸酶(MNase)分析表明,在基因轉錄起始位點上游,無核小體的DNA片段將被轉錄。

 

考慮到這一點,他們首先著手研究與表達相關的核小體占據是否可通過cfDNA來檢測,以及這種標志是否反映了基因表達。之后,研究人員進一步擴展了分析。他們獲取基因表達譜,以便從癌癥患者的血液樣本中搜索癌癥驅動基因。

 

研究人員從50名健康男性和54名健康女性中采集到179個血液樣本。他們利用IlluminaMiSeqNextSeq儀器開展雙端測序,以鑒定血漿中與核小體相關的核DNA。然后,他們生成了單端測序數據,用它來評估轉錄起始位點周圍的讀取深度模式,并參考現有的MNase圖以及ENCODEFANTOM5項目的基因表達數據。這些信息也幫助研究人員開發出預測表達的算法。

 

之后,研究人員證明,對兩名乳腺癌患者的循環腫瘤DNA進行全基因組測序,可獲取基因表達和拷貝數圖譜。于是,他們接著采集了其他癌癥患者的血液樣本,包括轉移性結腸癌、肺癌或前列腺癌,查看了426個樣本的基因表達和拷貝數變化。

 

研究人員指出,這種方法似乎特別適合檢測影響癌癥驅動基因的擴增。不過,他們警告說,它可能不適合在微小殘留病的背景下評估循環腫瘤DNA

 


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