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替代PCR,RPA在癌癥研究中的應用

日期:2014-11-03 09:03:46

 

重組酶聚合酶擴增RPA被稱為是可以替代PCR的核酸檢測技術。RPA擴增的速度非常快,靈敏度高,對硬件設備要求低,而且不需要復雜的樣本處理。這樣的技術特別適合于體外診斷、獸醫、食品安全、生物防御、農業等領域。自人類對癌癥“宣戰”以來已經過去了四十多年,這種惡性疾病仍舊是一團揮之不去的陰影。統計數據表明,2012年世界上有15%的死亡是癌癥造成的。隨著發展中國家逐漸接納西方國家的飲食和生活方式,這一數字在未來幾十年中肯定還會上升,這無疑給發展中國家敲響了警鐘。

 

RPA用于癌癥突變檢測

 

新加坡A*STAR的研究團隊去年六月在Lab on a Chip雜志上,發表了一種能夠快速檢測癌癥單點突變的新技術,等溫固相擴增/檢測(ISAD)。這是一種無需標記的實時檢測技術,將基于硅基微環(silicon microring)的固相擴增與等溫重組酶聚合酶擴增(RPA)結合在一起。

 

在這項研究中,ISAD主要用于檢測HRASHarvey RAS)基因的單點突變。在固相擴增階段,引物直接連在設備的表面。在擴增過程中,硅基微環諧振器會發生光的波長漂移,在此基礎上就能對擴增DNA進行檢測,不需要任何標記。

 

研究顯示,與RPA和傳統PCR方法相比,ISAD技術的靈敏度要高一百倍。這個技術能夠在擴增過程中區分HRAS基因的一個單點突變。由此可見,ISAD能夠用于突變、單核苷段多態性和癌癥指標的檢測。

 

RPA用于抗癌藥物篩選

 

去年十月,Talanta雜志上也發表了一項用到RPA技術的癌癥研究。該研究在超靈敏生物條碼分析(BBC)、適配體(aptamer)和RPA的基礎上,開發了一個檢測細胞色素CCyto-c)的新生物條碼分析法(ABC)。細胞色素C是細胞死亡的重要標志物。

 

適配體是一種單鏈短DNA,它折疊形成的3D結構能夠結合特定的目標分子,具有高親和力和特異性。

 

研究人員在BBC分析的基礎上進行優化,采用了Cyto-c特異性的適配子,并用等溫重組酶聚合酶擴增(RPA)替代了耗時長的PCR。研究顯示,ABC分析的檢出限低至10 ng/mL,而且可以在三小時內完成。研究人員用ABC方法對一些潛在的抗癌藥物進行了體外測試,檢驗了它們對不耐藥和多重耐藥性肝癌的殺傷效果。

 


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