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【華美講堂 第十一期】ELISA檢測高性能探討

瀏覽次數:72      日期:2023-12-19 14:43:53


主題
  ♦ ELISA檢測高性能探討
 
講師
申艷麗  武漢華美生物  高級技術工程師
 
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    1960年,美國科學家Yalow和Berson首先應用放射免疫試驗(Radioimmnuoassay, RIA)技術,檢測血漿中內源性的胰島素,解決了以前難以測定的微量生物活性物質的臨床檢測問題,也因此獲得了1977年的諾貝爾生理學或醫學獎。無可否認,RIA技術是免疫測定技術發展史上的里程碑,但由于試劑半衰期短、放射危害、對實驗室特殊設備的要求以及昂貴的計數設備,逐步被非同位素標記物建立的免疫標記測定技術代替。
1971年瑞典學者Engvail和Perlmann,荷蘭學者Van Weerman和Schuurs分別報道將免疫技術發展為檢測體液中微量物質的固相免疫測定方法,即酶聯免疫吸附測定法 (ELISA) 。
 
    ELISA,即酶聯免疫吸附技術,是一種應用廣泛的免疫檢測方法。其基本原理是:以免疫學反應為基礎,將抗原、抗體的特異性反應與酶對底物的高效催化作用相結合起來的一種敏感性很高的試驗技術。
 
    依據ELISA基本原理,其可以分為直接法、間接法、雙抗夾心法、競爭法。針對不同的方法,都有其各自的適用性;而針對不同的研究指標,都有其相對適用型的ELISA。對于免疫檢測常用方法,免疫組化(Immunohistochemistry, IHC)具有較強針對性,并可在組織和細胞中進行抗原的準確定位以及定性分析,一般不用于定量檢測;雖然蛋白質印跡(Western Blot, WB)也可進行定性和定位(通過提取膜蛋白或核蛋白、胞漿蛋白分別檢測其中抗原含量,進而間接反映它們的定位),定量則可能更加準確,但其敏感性遠遠低于IHC。而ELISA與IHC、WB相比,定量最準確,靈敏度更高,是蛋白檢測首選方法之一,尤其對于定量分析多個樣本非常有用,所用試劑和樣品量很少,結果精確。
 
    ELISA作為一項成熟的檢測技術,通常在96微孔板中進行,可用于檢測血清、血漿、細胞培養上清液、細胞裂解液、唾液、組織裂解液和尿液等多種樣本,通過抗原抗體的特異性反應以及顯色反應進行高通量檢測,其檢測速度快、操作簡單、成本低廉,在生物技術學術機構、生物基礎研究實驗室等多機構廣泛應用。

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